Визначення кількості лейкоцитів у камері горяєва. Методика підрахунку лейкоцитів у камері горяєва, норми показників та відхилення. Визначення полів зору
Камера Горяєва – це пристосування для вимірювання кількості клітин та частинок у певному обсязі рідини (кров, сеча), що складається із спеціального товстого предметного та покривного скла.
Предметне скло має заглиблений майданчик посередині, на який нанесена сітка з 225 великих квадратів. З цих квадратів 25 рівномірно поділено на 16 менших квадратів. Завдяки такому об'єму сітки підрахунок виконується точніше, ніж в інших лічильниках.
Камера Горяєва
Обслуговування камери
Після використання інструменту предметне скло дезінфікують шляхом занурення в 4% розчин формаліну на годину або 70% розчин етилового спирту на півгодини. Після цього камеру ретельно промивають дистильованою водою. Надлишок рідини прибирають м'якою серветкою. Варто звернути увагу на те, що камеру не можна протирати ватним тампоном через волокна, що чіпляються до неї. Зберігається скло у сухому місці.
Правило Єгорова
Під час використання камери підраховуються ті ФЕ, які розташовуються всередині квадрата сітки і на верхній і лівій лінії його периметра. При цьому частинки, що стосуються правої та нижньої лінії периметра, під час розрахунку даної клітини не включаються.
Визначення лейкоцитів у крові
Методика підрахунку лейкоцитів
Підрахунок кількості лейкоцитів починається з розведення крові у 3-5% розчині етанової кислоти з метиловою синьою у 20 разів. Робочий матеріал перед застосуванням протирають марлею насухо.
Покривне скло потрібно протерти до появи кольорових кілець Ньютона. Далі камеру заповнюють розведеною кров'ю, при цьому перші дві краплі випускають на фільтрувальний папір. Рідина потрапляє до камери завдяки капілярній властивості води. Важливо простежити, щоб у жолобки під час заповнення нічого не затікало. Якщо це сталося, рідину акуратно прибирають фільтрувальним папером. Потім залишають сітку у спокої на хвилину, чекаючи, поки ФЕ зупинять свій рух.
Підрахунок лейкоцитів здійснюється в межах ста великих квадратів при малому збільшенні, тобто при окулярі 10х і об'єктиві 8х за правилом Єгорова. Отримана цифра використовується у формулі.
Х = (n × 250 × 20) / 100 або Х = n × 50
Х – кількість лейкоцитів.
n - число, отримане в результаті підрахунку камери.
Кількість лейкоцитів визначають, враховуючи кількість великих квадратів сітки – 100 і розведення крові – 20.
Як відбувається підрахунок лейкоцитів Норма лейкоцитів та відхилення
Норма лейкоцитів у людей становить 4,0 – 9,0×10⁹/л. Або, по-іншому, в 1 кубічному мм крові знаходиться приблизно 6000 білих кров'яних клітин.
На відхилення від норми можуть впливати зовнішні фізіологічні чинники:
- прийом їжі перед здаванням крові;
- стрес;
- вагітність чи менструація у жінок;
- переохолодження чи перегрів;
Якщо кількість білих кров'яних клітин перевищує 9,0 × 10⁹/л (підвищено лейкоцити), такий стан називається лейкоцитозом. Подібну картину можна побачити при злоякісних захворюваннях крові, інфекціях, ураженнях радіацією та отруєннях.
Лікарські препарати також здатні збільшити кількість лейкоцитів. Некроз тканин, рясні кровотечі, у тому числі в результаті операцій, ниркова кома, хвороби серця – все це може призвести до лейкоцитозу.
Падіння кількості лейкоцитів нижче 3,9×10⁹/л називається лейкопенією. Однак у деяких людей фіксується постійне число лейкоцитів у кількості 3,5×10⁹/л. Вважають, що в таких людей зберігається резерв цих клітин у тканинах у 50 разів більше, ніж у крові. Ще зустрічається функціональна лейкопенія після введення аналгетиків, сульфаніламідів та інших лікарських препаратів, після довгої м'язової роботи, внаслідок ураження інфекціями та вірусами (тиф, грип, кір).
Лейкоцитарна формула
Усі види лейкоцитів становлять лейкоцитарну формулу. Нею можна виявити певні патології. Норми формули змінюються залежно від віку та періоду життя людини. Зрушення добре помітне у жінок під час вагітності або після пологів.
Застосовуються різні способи підрахунку співвідношення видів цих клітин, але вони пов'язані з тим, що більш важкі клітини (базофіли, наприклад) розташовуються ближче до краю мазка, а лімфоцити, як легкі клітини, залишаються у середині.
- Метод Філіпченка. У цьому способі підрахунок здійснюється по поперечній прямій межі одного кінця до іншого. Мазок у своїй подумки поділяють три частини.
- Метод Шилінгу. Лейкоцити підраховують у чотирьох ділянках мазка.
Отримані дані записуються до таблиці. Індивідуально кількість кожного виду білих клітин крові обчислюється за формулами. Наголошуються ті елементи, які потрапили у поле зору. Рахунок ведеться до того моменту, поки сума всіх підрахованих клітин не складе 100.
Методика підрахунку лейкоцитів у сечі
У сечі підраховується кількість лейкоцитів у камері Горяєва щодо Нечипоренка. Цей аналіз необхідний моніторингу захворювань нирок. Періодичне дослідження сечі допомагає простежити за правильністю лікування та ефективністю призначеної терапії.
Збір сечі
У вивчення йде лише перша ранкова сеча в середині сечовипускання. Для пацієнта важливо дотримуватися основних правил збору цього біоматеріалу. Спеціальної додаткової підготовки для дослідження не потрібно.
Методика розрахунку
10 мл свіжозібраної сечі центрифугують протягом трьох хвилин при 2,5 тис. оборотів за хвилину. Перед цим необхідно простежити, щоб сеча, щоб уникнути часткового розпаду клітин, мала слабокислу реакцію.
За допомогою піпетки з вузьким відтягнутим кінцем видаляють верхній шар. У пробірці залишають від 0,5 мл сечі до 1 мл залежно від об'єму осаду.
Осад акуратно перемішують із надосадовою рідиною. Отриманим розчином заповнюють лічильну камеру Горяєва за схожим принципом, що використовується при підрахунку ФЕ крові. Камеру дають спокій від 3 до 5 хвилин.
Отримана цифра використовується у формулі:
Х = (а/0,9) × (1000/V)
Х – число лейкоцитів на 1 мл сечі.
а - підрахована кількість, поділена на об'єм камери в 1 мкл осаду сечі.
v – Кількість сечі, взятої на дослідження.
1000 – кількість осаду.
Це важливо! Норма лейкоцитів: в 1 мл сечі не більше 2×10 білих кров'яних клітин.
Ще:
Різновиди лейкоцитів у крові, у чому їхня важливість для людини?
Підрахунок кількості лейкоцитів крові може бути зроблений у лічильній камері Бюркера з сіткою Горяєва або в електронно-автоматичних аналізаторах («Целлоскоп», «Культер», «Технікан»).
Методика підрахунку в камері Бюркера із сіткою Горяєва
Принцип методу:аналогічний такому підрахунку еритроцитів, суть його полягає в точному відмірюванні крові та її розведенні у певному обсязі рідини з наступним підрахунком клітинних елементів у лічильній камері та перерахунку отриманого результату на 1 крові.
Обладнання та реактиви:
змішувачі чи пробірки для підрахунку лейкоцитів;
3% розчин оцтової кислоти, до якого додано кілька крапель метилвіолету або метиленового синього;
лічильна камера;
мікроскоп.
Змішувач для лейкоцитів відрізняється від такого для еритроцитів тим, що має ширший просвіт капіляра та менший за величиною резервуар. На змішувач нанесено три мітки: 0,5, 1,0 і 11. Це дозволяє розвести кров у 10 або 20 разів (частіше розводять у 20 разів).
Хід дослідження:при взяття крові для підрахунку лейкоцитів зі шкіри попередньо видаляють ватним тампоном залишки крові і, злегка стискаючи палець, випускають свіжу краплю крові. Працюючи зі змішувачами кров набирають до мітки 0,5, потім розводять 3 % розчином оцтової кислоти до мітки 11. Енергійно струшують протягом 3 хв, після чого зливають 1-2 краплі і заповнюють лічильну камеру. При роботі з пробірками для підрахунку лейкоцитів наливають 0,4 мл 3% розчину оцтової кислоти та в неї випускають 0,02 мл крові, відміряної піпеткою від гемометра Салі. Ретельно струшують пробірки, потім рідину опускають піпетку і, набравши вміст, заповнюють лічильну камеру. Так як лейкоцитів набагато менше, ніж еритроцитів, то для отримання достовірного та точного результату підрахунок роблять у 100 великих (нерозграфлених) квадратах. Зазвичай в одному великому квадраті знаходиться 1-2 лейкоцити. Число лейкоцитів в 1 мкл крові розраховується аналогічно до розрахунку числа еритроцитів за формулою
X = (А х 4000 х В)/Б,
де X – кількість лейкоцитів в 1 мкл крові; А – кількість лейкоцитів, порахованих у 1600 малих квадратах; Б – кількість порахованих малих квадратів (1600); 4000 - величина, помножуючи яку, ми отримуємо кількість клітин на 1 мкл.
Інтерпретація даних.Нормальна кількість лейкоцитів: 4.0 – 9.0 х 109/л. Зменшення їх числа у крові називається лейкопенією, збільшення – лейкоцитозом.
Лейкоцитозможе бути абсолютним (справжнім) та відносним (перерозподільним).
Абсолютний лейкоцитоз – спостерігається при гострих запальних процесах, некрозі тканин, гострих бактеріальних інфекціях (за винятком черевного тифу, бруцельозу, туляремії та ін.), алергічних станах, злоякісних пухлинах (з деструкцією тканин) та закритих травмах черепах уремічній комі, шоці, гострій крововтраті, як первинна реакція – при променевій хворобі. Значне підвищення кількості лейкоцитів зустрічається при лейкозах.
Відносний (перерозподільний) є наслідком надходження лейкоцитів у потік крові з органів, що є для неї депо. Це відбувається після прийому їжі (харчовий лейкоцитоз), гарячих та холодних ванн, сильних емоцій (вегетосудинний лейкоцитоз), інтенсивної м'язової роботи (міогенний лейкоцитоз) тощо.
Лейкопенія.Лейкопенія розглядається як показник пригнічення функціональної здатності кісткового мозку внаслідок впливу токсичних речовин (миш'як, бензол тощо), деяких медикаментів (сульфаніламіди, левоміцетин, бутадіон, іммуран, циклофосфан тощо), вірусів (грипу, вірусного , кору тощо), мікробів (черевного тифу, бруцельозу тощо), іонізуючої радіації, рентгенівського випромінювання та гіперспленізму (збільшення функції селезінки).
Лейкоцитоз та лейкопенія рідко характеризуються пропорційним збільшенням (зниженням) сумарного числа лейкоцитів усіх видів (наприклад, лейкоцитоз при згущенні крові); в більшості випадків є збільшення (зменшення) числа якогось одного типу клітин, тому застосовують терміни «нейтрофілоз», «нейтропенія», «лімфоцитоз», «лімфопенія», «еозинофілія», «еозинопенія», «моноцитоз», «моноцитопенія» , "Базофілія".
При клінічній оцінці зміни кількості лейкоцитів велике значення надається відсоткове співвідношення окремих форм лейкоцитів, тобто лейкоцитарної формули.
Лейкоцитарна формула крові здорової людини:
Відносна кількість Абсолютна кількість
Базофіли……………………….0-1% 0-0,0650 х 10 9 /л
Еозинофіли…………………….0.5-5% 0,02-0,30 х 10 9 /л
Нейтрофіли: - мієлоцити…………0% відсутні
Метамієлоцити……0% відсутні
Паличкоядерні ......1-6% 0,040-0,300 х 10 9 /л
Сегментоядерні….47-72% 2,0-5,5 х 109/л
Лімфоцити……………………….19-37% 1,2-3,0 х 10 9 /л
Моноцити………………………….3-11% 0,09-0,6 х 10 9 /л
Підрахунок лейкоцитарної формули роблять у забарвлених мазках периферичної крові. Для правильної інтерпрепатації результатів дослідження лейкоцитарної формули рекомендується робити підрахунок у абсолютних кількостях, а чи не у відносних. Найбільш поширені методи фарбування мазків по Романівському-Гімзі, за Паппенгеймом. Під імерсією вважають щонайменше 200 клітин, та був виводять відсоткове співвідношення окремих видів лейкоцитів. Аналіз лейкограми з урахуванням інших показників крові та клінічної картини є цінним методом обстеження, що допомагає у постановці діагнозу та визначенні прогнозу захворювання.
Основні причини нейтрофілозу.
Гострі бактеріальні інфекції – локалізовані та генералізовані.
Запалення чи некроз тканини.
Мієлопроліферативні захворювання.
Інтоксикація.
Лікарські дії (кортикостероїди).
Гострі кровотечі.
Основні причини нейтропенії.
Інфекції – бактеріальні (черевний тиф, бруцельоз, туляремія, паратифи) та вірусні (інфекційний гепатит, кір, грип, краснуха та інші).
Мієлотоксичні впливи та супресія гранулоцитопоезу (іонізуюча радіація; хімічні агенти – бензол, анілін, ДДТ; лікарські впливи – цитостатики та імунодепресанти; вітамін-В 12 -фолієводефіцитна анемія, гострий алейкемічний лейкоз), апластична
Вплив антитіл (імунні форми) – гіперчутливість до медикаментів, аутоімунні захворювання (ВКВ, ревматоїдний артрит, хронічний лімфолейкоз), ізоімунні прояви (гемолітична хвороба новонароджених).
Перерозподіл та депонування в органах – шокові стани, захворювання зі спленомегалією та гіперспленізмом.
Спадкові форми (сімейна доброякісна хронічна нейтропенія).
Основні причини еозинофілії.
Алергічні захворювання.
Хронічні ураження шкіри - псоріаз, пухирчатка, екзема.
Пухлини (еозинофільні варіанти лейкозу).
Інші захворювання – фібропластичний ендокардит Леффлера, скарлатина.
У фазі одужання при інфекціях та запальних захворюваннях (сприятлива прогностична ознака).
Причини еозинопенії (анеозинофілії).
Підвищена адренокортикостероїдна активність в організмі.
Черевний тиф.
Основні причини базофілії:
Хронічний мієлолейкоз та еритремія.
Основні причини моноцитозу.
Підгострі та хронічні бактеріальні інфекції.
Гемобластози – моноцитарний лейкоз, лімфогранулематоз, лімфоми.
Інші стани – ВКВ, саркоїдоз, ревматоїдний артрит, інфекційний моноцитоз; у період одужання від інфекцій, при виході з агранулоцитозу, після спленектомії.
Зниження числа моноцитів має значення головним чином в оцінці лімфоцитарно-моноцитарного співвідношення при легеневому туберкульозі.
Основні причини лімфоцитозу.
Інфекції – гострі вірусні (інфекційний мононуклеоз, кір, краснуха, вітряна віспа), хронічні бактеріальні (туберкульоз, сифіліс, бруцельоз), протозойні (токсоплазмоз).
Гемобластоз (лімфолейкоз, лімфоми).
Інші захворювання - гіпертиреоз, аддісонова хвороба, вітамін-В 12 -фолієво-дефіцитна анемія, гіпо- та апластичні анемії.
Лімфоцитопеніяспостерігається при ВКВ, лімфогранулематозі, поширеному туберкульозі лімфовузлів, у термінальній стадії ниркової недостатності, гострій променевій хворобі, імунодефіцитних станах, прийомі глюкокортикоїдів.
Збільшення чи зменшення кількості окремих видів лейкоцитів у крові може бути відносним чи абсолютним. Якщо змінюється лише відсоткове зміст тієї чи іншої виду лейкоцитів, має місце відносна нейтрофілія, відносна еозинопения і т.д. Збільшення або зменшення абсолютного вмісту будь-якого виду лейкоцитів, тобто кількості даних клітин в одиниці об'єму крові, називають абсолютною нейтрофілією, абсолютною еозинопенією тощо.
Зсув формули вліво (збільшення кількості молодих форм нейтрофілів) – ознака запалення чи некротичного процесу у організмі.
Зсув лейкоцитарної формули вправо характерний для променевої хвороби та вітамін-В 12 -фолієводефіцитної анемії.
Відсутність чи значне зниження кількості всіх видів зернистих лейкоцитів – гранулоцитів (нейтрофілів, еозинофілів, базофілів) позначають терміном агранулоцитоз. Залежно від механізму виникнення розрізняють мієлотоксичний (вплив іонізуючого випромінювання, прийом цитостатиків) та імунний (гаптеновий та аутоімунний агранулоцитоз).
– оптичний пристрій для підрахунку клітин або інших порівнянних з ними частинок у заданому обсязі рідини. Складається з товстого предметного скла, що має прямокутне заглиблення (камеру) з нанесеною мікроскопічною сіткою та тонкого покривного скла. Камера розроблена професором Казанського університету Горяєвим Н.К. Завдяки збільшеному об'єму сітки відрізняється більшою точністю підрахунку порівняно з іншими камерами (Тома, Цейса, Тюрка, Бюркера).
Технічні характеристики камери
Розміри малого квадрата камери Горяєва 0,05×0,05 мм
Розміри великого квадрата камери Горяєва 0,2×0,2 мм
Глибина камери 0,1 мм
Об'єм рідини під 1 малим квадратом 0,00025 мм3 (мкл) = 1/4000 мм3 (мкл)
Об'єм рідини під 1 великим квадратом 0,004 мм3 (мкл) = 1/250 мм3 (мкл)
Об'єм камери Горяєва 0,9 мм3 (мкл)
Опис сітки камери Горяєва
Сітка камери Горяєва складається з 225 великих квадратів, з яких 25 розділені на 16 малих квадратів.
Рис 1. Сітка камери Горяєва
Рис 2. Великий (1) та малий (2) квадрати сітки камери Горяєва
Рис 3. 225 великих квадратів сітки камери Горяєва
Рис 4. 100 великих квадратів сітки камери Горяєва
Рис 5. Великий квадрат камери Горяєва розділений на 16 малих квадратів.
Обслуговування камери Горяєва
Між роботою камера повинна зберігатись у сухому місці. Після роботи камера дезінфікується зануренням на 30 хвилин 70% розчин етилового спирту, або на 60 хвилин 4% розчин формаліну, після чого камера промивається дистильованою водою і протирається м'якою серветкою.
Правило підрахунку клітин у квадраті (правило Єгорова)
У квадраті вважаються клітини, що лежать усередині нього, а також стосуються лівої та верхньої меж. Клітини, що стосуються правої та нижньої меж при підрахунку не враховуються.
Методика підрахунку лейкоцитів у камері Горяєва
Розвести зразок досліджуваної крові в 20 разів 3-5% розчином оцтової кислоти з метиленовим синім (наприклад, 20 мкл крові та 380 мкл розчину оцтової кислоти). Камеру та покривне скло насухо протерти марлею. Не допускається використання для протирання ватних тампонів через волокна, що залишаються на склі. Акуратно притерти покривне скло до камери, трохи натискаючи на нього до появи кольорових кілець Ньютона. Заповнити камеру розведеною кров'ю та витримати 1 хвилину для припинення руху клітин. При малому збільшенні (окуляр 10, об'єктив 8) порахувати лейкоцити в 100 великих квадратах. Розрахунок числа лейкоцитів здійснюють, виходячи з розведення крові (20) та числа великих квадратів (100), за формулою: X = (a×250×20)/100, де Х – число лейкоцитів в 1 мкл крові; а – число лейкоцитів, порахованих у 100 великих квадратах камери Горяєва. Практично після скорочень у формулі кількість порахованих лейкоцитів множать на 50.
Методика підрахунку еритроцитів у камері Горяєва
Розвести зразок досліджуваної крові у 200 разів у 0,9% розчині NaCl або розчині Гайєма (береться 20 мкл крові та 4 мл розчину). Камеру та покривне скло насухо протерти марлею. Не допускається використання для протирання ватних тампонів через волокна, що залишаються на склі. Акуратно притерти покривне скло до камери, трохи натискаючи на нього до появи кольорових кілець Ньютона. Заповнити камеру розведеною кров'ю та витримати 1 хвилину для припинення руху клітин. При малому збільшенні (окуляр 10, об'єктив 8) порахувати еритроцити в 5 великих квадратах розділених на 16 малих (тобто в 80 малих квадратах). Рекомендується вважати клітини у квадратах, розташованих по діагоналі. Розрахунок числа еритроцитів здійснюють, виходячи з розведення крові (200) та числа малих квадратів (80), за формулою: X = (a 4000 200) / 80, де Х - число еритроцитів в 1 мкл крові; а – число еритроцитів, порахованих у 80 малих квадратах камери Горяєва. Практично після скорочень у формулі кількість порахованих еритроцитів множать на 10 000.
Для підрахунку кількості лейкоцитів кров розводять у 20 разів за допомогою реактиву – рідина Тюрка (3% оцтова кислота, підфарбована метиленовим синім). Кислота руйнує оболонки клітин крові (еритроцитів та лейкоцитів), а метиленовий синій підфарбовує ядро лейкоцитів. Розведення можна робити у лейкоцитарних меланжерах (змішувачах) чи пробірках.
Для пробіркового способу розведення беруть 0,4 мл рідини Тюрка та додають 0,2 мл крові. Отриманий розчин перемішують, заправляють у камеру Горяєва, поміщають під мікроскоп та підраховують лейкоцити у сітці Горяєва.
Вважають у 100 великих нерозділених квадратах. Кількість лейкоцитів підраховують за такою формулою:
Х = А * 50
Отримуємо кількість лейкоцитів в 1 мкл крові, наприклад, 4500 (4,5 тис. в 1 мкл) або 4,5 * 109/л
Збільшення кількості лейкоцитів називається лейкоцитоз . Лейкоцитоз буває фізіологічний, медикаментозний та патологічний.
Фізіологічний лейкоцитоз спостерігають при вагітності, після їди у моногастричних тварин, а також після важкого фізичного навантаження.
Медикаментозний лейкоцитоз виникає після парентерального введення тваринам білкових препаратів, вакцин, сироваток та ін.
Патологічний Лейкоцитоз виникає завжди при запальних процесах, гнійно-некротичних процесах, при інфекційних захворюваннях.
Зменшення кількості лейкоцитів називається лейкопенія . Вона зустрічається при виснаженні, променевій хворобі, при деяких інфекційних та вірусних захворюваннях.
Вивчення морфології клітин крові
Морфологію клітин крові вивчають у мазках крові під мікроскопом. Для цього потрібно приготувати мазок крові .
Використовують чисте знежирене скло.
При приготуванні мазка предметне скло затискається між великим та середнім пальцями лівої руки. У правій руці знаходиться шліфоване покривне скло. Для отримання мазків хорошої якості потрібно брати невеликі краплі крові.
Притуливши край покривного скла до краплі крові, що знаходиться на предметному склі, дають можливість розподілитися їй між двома стеклами. Якщо скло чисте і сухе, кров, в силу капілярності, розподіляється майже моментально. Кут між покривним та предметним склом не повинен перевищувати 45-50 0 . Покривне скло фіксується між пальцями правої руки так, щоб кінчик одного або обох пальців торкався краю предметного скла. У цих випадках мазки виходять із рівними краями. Пересуваючи покривне скло предметним спокійно і не дуже швидко, готують мазок. Кров під час руху покривного скла тягнеться за склом і не піддається травмуванню.
Похибки під час приготування мазка
Добре приготований мазок повинен займати 2/3 скла та закінчуватися «мітелкою».
Після приготування мазок повинен висохнути. Потім проводять його фіксаціюз метою запобігання руйнуванню клітин крові та закріпленню їх на склі.
Після фіксації проводять забарвленнямазків. Існує кілька способів фарбування мазків крові:
Метод Романовського-Гімзе . Фіксовані етиловим спиртом (20 хвилин) або сумішшю Никифорова (етиловий спирт + етиловий ефір у співвідношенні 1:1) мазки заливають робочим розчином барвника Романовського-Гімзе на 20-30 хвилин. Потім мазки промивають дистильованою водою, висушують та мікроскопують. Приготування робочого розчину: 2 краплі заводського фарбника на 1 мл дистильованої води.
Метод Май-Грюнвальда . Висушений препарат фіксують концентрованим розчином йозину Май-Грюнвальда 3 хвилини, промивається дистильованою водою. Потім мазки забарвлюються робочим розчином протягом 10 хвилин, знову промиваються дистильованою водою, висушуються та мікроскопуються.
Є кілька способів проведення мікроскопіїзалежно від якості виготовлення мазка.
Якщо мазок густий, то краще мікроскопувати в області волоті однопольним методом.
Рівномірний мазок мікроскопують декількома способами:
Ступінчастий (б)
Однопільний
Трипільний(а)
Чотирьохпільний (в)
Мазок крові поміщають під мікроскоп, наносять краплю інверсійної олії та досліджують.
Насамперед досліджують Лейкоцити . Залежно від характеру та наявності зернистості в цитоплазмі лейкоцити поділяють на:
Гранулоцити або зернисті: еозинофіли, базофіли, нейтрофіли; їхня цитоплазма містить зернистість;
Агранулоцити або незернисті: лімфоцити, моноцити; їхня цитоплазма не містить зернистості.
Під час дослідження лейкоцитів виводять лейкограму – це відсоткове співвідношення окремих видів лейкоцитів, записане у порядку. Сума клітин лейкограми повинна дорівнювати 100.
* - абсолютна кількість кожного виду лейкоцитів
Б азофіли. Ядро неправильної форми, у цитоплазмі міститься зернистість темно-фіолетового кольору. У нормі 0,1-0,2, найчастіше у лейкограмі їх немає.
Е озинофіли. Містять у цитоплазмі рожеву або яскраво-червону зернистість (гранули).
Н ейтрофіли. Їхня зернистість у цитоплазмі практично не видно. Залежно від зрілості нейтрофіли поділяються на:
- М ієлоцити– незріла форма нейтрофілів; зустрічається лише за сильної патології. Містять округле ядро.
У процесі дозрівання відбувається центральне вдавлювання ядра à Ю нінейтрофіли: має підковоподібний вигляд, зустрічається лише при патології; незріла форма нейтрофілів.
- П алочкоядернінейтрофіли - в нормі присутні в невеликій кількості (0-5). Належать до незрілих форм нейтрофілів.
- З егментоядернінейтрофіли - зріла форма нейтрофілів. Ядро сегментоване складається з 2-5 сегментів, які з'єднані тонкими перешийками. Якщо сегментоядерний нейтрофіл "старий", то сегменти ядра відокремлюються один від одного і ядро руйнується.
Л імфоцити- великі клітини, що практично повністю складаються з ядра, яке пофарбоване в темно-фіолетовий колір; цитоплазма світло-блакитна, може бути непомітною. Зернистість цитоплазми відсутня.
У всіх тварин, окрім кішки, лімфоцитарний профіль крові; у кішки – нейтрофільний.
М оноцити– великі клітини із ядром неправильної форми. Зернистості цитоплазми немає.
Зміна лейкограми відбувається у трьох напрямках:
1)Збільшення чи зменшення змісту окремих видів лейкоцитів, тобто. видові лейкоцитози та видові лейкопенії.
2) Поява в лейкограмі молодих та незрілих форм нейтрофілів.
3) Виникнення патологічних змін у ядрі та цитоплазмі.
Видові лейкоцитози та видові лейкопенії
Збільшення базофілів називається базофілія .
Збільшення еозинофілів – еозинофілія .
Зменшення еозинофілів – еозинопенія .
Збільшення будь-якого виду нейтрофілів називається нейтрофілія .
Зменшення будь-якого виду нейтрофілів називається нейтропенія .
Збільшення лімфоцитів – лімфоцитоз .
Зменшення лімфоцитів – лімфоспіння .
Збільшення моноцитів - моноцитоз .
Зменшення моноцитів - моноцитопенія .
Збільшення чи зменшення вмісту будь-якого виду лейкоцитів може бути абсолютним та відносним.
Абсолютний видовий лейкоцитоз характеризується збільшенням абсолютного числа лейкоцитів даного виду при нормальній чи підвищеній загальній кількості лейкоцитів у крові.
Відносний видовий лейкоцитоз супроводжується зменшенням загальної кількості лейкоцитів та переважанням у крові лейкоцитів даного виду за рахунок зменшення числа інших форм клітин. При цьому абсолютна кількість лейкоцитів переважаючого виду залишається в межах норми.
Іноді крім лейкограми (вважають у мазку крові) визначають загальну кількість лейкоцитів та абсолютний вміст лейкоцитів кожного виду в 1 мкл крові (у камері Горяєва).
Оцінюючи лейкограми використовують термін « ядро лейкограми ». Ядром лейкограми є нейтрофіли.
При збільшенні відсотка Палочкоядерних лейкоцитів, а також Мієлоцитів та Юних, говорять про зрушенні ядра вліво .
При збільшенні відсотка Зегментоядерних лейкоцитів говорять про зрушенні ядра вправо .
Індекс ядерного зсуву визначають за такою формулою: ІС = .
При нормальномукількості паличкоядерних та сегментоядерних нейтрофілів індекс ядерного зсуву вбирається у 0,06-0,08.
Ядерне зрушення від 0,08 до 0,15називається слабким лівимзрушенням.
Ядерне зрушення від 0,15 до 0,45називається середнім лівимзрушенням.
Показник ядерного зсуву нижче 0,05вказує на зрушення вправо.
Нейтрофілія - Збільшення будь-якого виду нейтрофілів.
Нейтрофілія зі зсувом ядра вліво буває декількох різновидів:
1. Нейтрофілія із простим регенеративним зрушенням характеризується збільшенням числа паличкоядерних нейтрофілів до 10-15%. Відсоток сегментоядерних клітин при цьому в нормі або зменшився. Загальна кількість лейкоцитів збільшена незначною мірою. Цей різновид нейтрофілії спостерігають при гострих інфекціях, що легко протікають, запальних і некротичних процесах м'яких тканин з доброякісним перебігом (рани, що нагноилися, місцеві гнійні набряки).
2. Нейтрофілія з різким регенеративним зсувом супроводжується поява в крові юних нейтрофілів та іноді мієлоцитів, підвищенням відсотка паличкоядерних та зниженням сегментоядерних нейтрофілів. Загальна кількість лейкоцитів збільшено. Зустрічається при гострих інфекціях, перитоніті, запальних захворюваннях внутрішніх органів.
3. Нейтрофілія з дегенеративним зсувом характеризується збільшення відсотка паличкоядерних клітин, появою дегенеративних форм нейтрофілів, зменшенням сегментоядерних. Загальна кількість лейкоцитів при цьому залишається в нормі або трохи знижено. Такий стан розвивається при тривалому впливі на кровотворні органи бактеріальних отрут, хімічних речовин, при тяжких гнильних інвазіях, виснаженні.
Нейтрофілія зі зсувом ядра праворуч характеризується збільшенням відсотка сегментоядерних нейтрофілів при нормальному або незначно зниженому відсотку паличкоядерних. Вона може бути трьох варіантів:
1. Незначне підвищення відсотка сегментоядерних на тлі невеликого лейкоцитозу - спостерігається після крововтрат, при легкому перебігу інфекційних захворювань.
2. Збільшення відсотка сегментоядерних при нормальній чи зниженій кількості лейкоцитів – у старих та виснажених тварин.
3. Значне зростання сегментоядерних при зниженні або відсутності паличкоядерних та вираженої лейкопенії - відзначають при хронічних септичних процесах, онкології, інвазійних захворюваннях, що важко протікають.
Нейтропенія - Зниження загальної кількості нейтрофілів. Нейтропенія спостерігається при інфекційних та вірусних хворобах, що протікають з лімфоцитозом. Нейтропенія на фоні гнійно-запального процесу свідчить про зниження опірності організму та несприятливому перебігу захворювання.
Лімфоцитоз - Збільшення кількості лімфоцитів. Зустрічається переважно при вірусних та бактеріальних захворюваннях, при хворобах крові та як відносний лімфоцитоз при нейтропенії.
Лімфоцитопенія - Зниження відсотка лімфоцитів. Часто лімфоцитопенію супроводжує нейтрофілію. Найбільш сильна лімфоцитопенія реєструється за імунодефіцитів.
Моноцитоз - Збільшення відсотка моноцитів. Часто спостерігається на стадії одужання, при інфекційних та гнійно-запальних захворюваннях, що вказує на хорошу опірність організму.
Базофілія - Збільшення відсотка базофілів. Відзначають при гельмінтозах, алергічних станах, хронічних хворобах шлунково-кишкового тракту.
Дослідження Ерітроцитів
Еритроцити здорових тварин мають такі морфологічні ознаки: відсутність ядра, фарбування в червонуватий або червонувато-жовтогарячий колір, форма двояковогнутого диска.
Основні відмінності еритроцитів різних видів тварин – різні розміри еритроцитів та інтенсивність центральної зони просвітлення.
Також морфологічною ознакою, яка може бути у здорових тварин, є злипання еритроцитів у вигляді монетного стовпчика. Найбільш виражений монетний стовпчик у крові коней і кішок. У ВРХ таких утворень немає.
Патологічні зміни еритроцитів частіше спостерігаються при анеміях та характеризуються:
1. Зміною розміру – анізоцитоз коли з'являються еритроцити більше звичайного (макрофітоз) і менше звичайного (мікроцитоз);
2. Зміною форми – пойкілоцитоз - Поява еритроцитів овальної, зірчастої або будь-якої іншої неправильної форми;
3. Зміною забарвлення – анізохромія - можуть з'являтися гіпохромні та гіперхромні еритроцити.
В еритроцитах може бути виявлено різні включення.
Оснащення: засоби індивідуального захисту, матеріал, матеріал, лоток, мікроскоп, камера Горяєва, пастерівські піпетки, штатив з пробіркою, дозатори з наконечниками, серветки, контейнери з дез.розчинами.
Реактив: розчин 3% оцтової кислоти
Алгоритм дій:
1. Вимити та осушити руки, надягти рукавички.
2. Відміряти в чисту суху пробірку 0,4 мл 3% оцтової кислоти.
3. Відміряти 0,02 мл цільної крові та протерти поверхню наконечника серветкою.
4. Внести до дослідної пробірки з 3% оцтовою кислотою 0,02 мл цільної крові.
5. Перемішати вміст пробірки та залишити стояти до моменту рахунку (5 хв).
6. Підготувати камеру Горяєва для підрахунку лейкоцитів.
7. Перед заповненням камери перемішайте вміст пробірки ще раз.
8. Нанести краплю розведеної крові пастерівською піпеткою на середню платівку камери біля краю покривного скла.
9. Покласти камеру на предметний столик на 1-2 хв, поки рух рідини в ній не припиниться, і еритроцити не осядуть. Увімкнути мікроскоп.
11. Здійснити розрахунок лейкоцитів за формулою в 1 л крові та записати до бланку.
X = (a x 20)/(100 x b)
де X – число лейкоцитів в 1 мкл крові; а – число порахованих лейкоцитів; b – об'єм одного великого квадрата 1/250 мм3;
20 – розведення крові;
100 - число великих квадратів, у яких вироблявся рахунок.
Кінцева формула
X = a x 50 x 106 (1 л)
12. Оцінити одержані результати з позиції «норма-патологія».
13. Забрати робоче місце.
Норма-патологія:
Еритроцити – норма
Лейкоцити – норма
458 – еритроцити
137 - лейкоцити
137 * 50 * 106 = 6850 * 106 = 6,85 х103 / мкл = 6,85 х109 / Л
Х = 4,58 х1012/Л
Гематологія
4) Клас проліфіричних клітин. Це клітини, що морфологічно розпізнаються. Так як за морфологією відрізняється від попередніх 3 класів. Мають велике пухке ядро з двома - чотирма ядерцями, цитоплазма базофільна
На відміну від попередніх клітин, бласт
5) клас дозріваючих клітин, характерних для свого ряду кровотворення
Тут може бути кілька різновидів клітин від одного до 5 в еритроцитарному ряду
6) клас зрілих клітин
Вони функціонують у периферичній крові, чи за межами судинного русла?
Назва кожної клітини
Гематологія
Анемії (малокровість) - являють собою велику групу патологічних станів та захворювань, для яких загальним ознак є зниження здатності крові переносити кисень.
Анемія – група захворювань, загальним моментом для яких є зниження концентрації гемоглобінуу крові, рідше при одночасному зменшенні числа еритроцитів(Ерітропенія).
Класифікація анемій:
6. За механізмом розвитку:
1. Анемії внаслідок крововтрат.
2. Анемії внаслідок посиленого кроворуйнування (гемолітичні).
3. Анемії внаслідок порушеного кровотворення.
7. За типом кровотворення
1. Нормобластичне
2. Мегалобластичні
8. За колірним показником:
1. Нормохромні, коли колірний показник дорівнює 0,82-1,05
2. Гіпохромні, якщо колірний показник менший за 0,82
3. Гіперхромні, коли колірний показник вище 1,05
9. За розміром еритроцитів:
1. Нормоцитарні (з нормальним середнім діаметром еритроцитів 7,2 – 8,0 мкм)
2. Мікроцитарні (середній діаметр еритроцитів нижче 7,2 мкм)
3. Макроцитарні (діаметр еритроцитів понад 8 мкм)
4. Мегалоцитарні (діаметр еритроцитів понад 10 мкм)
5. За регенераторною активністю кісткового мозку:
1. Регенераторні, із достатньою функцією кісткового мозку. Число Ретикулоцитів у периферичній крові 1,0 -5,0%
2. Гіпорегенераторні, зі зниженою регенераторною функцією кісткового мозку. Кількість Ретикулоцитів у периферичній крові 0,2%
3. Гіперрегенераторні, з підвищеною регенераторною функцією кісткового мозку. Кількість Ретикулоцитів у периферичній крові перевищує 5,0%
4. Арегенераторні, з різким пригніченням еритропоезу. Ретикулоцити в периферичній крові, як правило, не визначаються
Мікроцити – переважання у мазках крові еритроцитів з діаметром 5-6,5 мкм – спостерігають при спадковому сфероцитозі, залізодефіцитній анемії, таласемії. Всі ці клітини мають зменшений об'єм та меншу кількість Hb. В основі змін розмірів еритроцитів лежить порушення Hb синтезу.
Макроцитоз – переважання у мазках крові еритроцитів діаметром понад 9 мкм – виявляють при макроцитарних анеміях.
Мегалоцитоз – з'являється у мазках крові еритроцитів діаметром 11-12 мкм, гіперхромних, без просвітлення в центрі, овальної форми.
Анізоцитоз – присутність у мазках крові еритроцитів, що різняться за розміром: з переважанням еритроцитів малого діаметра – мікроанізацитоз, з переважанням еритроцитів великого діаметра – макроанізоцитоз.
З'являється на ранніх стадіях анемії та є діагностичною ознакою
Пойкілоцитоз – зміни різного ступеня вираженості форми еритроцитів, яка стає відмінною від дископодібної. Це найважливіша ознака патологічної зміни еритроцитів
Зміна забарвлення
Гематологія – практика